一、樣品的前處理
1、取0.5ml人血漿(S),按如下方法稀釋:0. 5mlS+0.5mID+1.5mlW→2.5mlS5
式中:D為專用的稀釋劑;W為專用的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(BET)用水;S5為稀釋了5倍的血漿,下標(biāo)數(shù)字表示稀釋倍數(shù)。
2、把裝有S5的小瓶置70℃的水浴中10分鐘。
3、把經(jīng)加熱處理的裝有S5的小瓶用3000rpm離心10分鐘,然后吸取上清液(仍記為S5)作 BET。
4、如果不立即作BET,可把經(jīng)離心的裝有S5的小瓶置2 ~3℃冰箱保存,可在3天內(nèi)作BET。
二、稀釋標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素
1、取效價為10Eu的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素(CSE)一支,開啟,加入0. 1mlW溶解,然后用封口膜封閉瓶口。
2、把裝CSE的安瓿放在旋渦混合器上強(qiáng)烈混合10分鐘得到濃度為10Eu/ml的CSE溶液,記為E10(E表示CSE,下標(biāo)數(shù)字表示濃度)。
3、按下圖步驟制備CSE濃度系列:
以上均需在旋渦混合器混合。
制備待測樣品
如下圖所示:
四、取鱟試劑(TAL)一支,按標(biāo)示裝量加W復(fù)溶
五、試管設(shè)置與加樣
在電腦的“檢測"程序上按下述方法設(shè)置反應(yīng)試管,并取反應(yīng)試管按下表要求加樣:
六、檢測
把加好樣的試管按編號順序插入檢測儀器的反應(yīng)孔中反應(yīng),每支試管在插入反應(yīng)孔前應(yīng)輕輕晃動搖勻試管中的內(nèi)容物。
七、結(jié)果處理
1、反應(yīng)的數(shù)據(jù)采集、處理、結(jié)果表達(dá)等均由檢測儀自動完成。
2、日常的檢測只需要設(shè)置編號1,2,9,10,11,12號的反應(yīng)試管,利用儲存的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可。