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體內(nèi)實驗中觀察到的內(nèi)毒素導(dǎo)致的血管對縮血管物質(zhì)反應(yīng)性降低的情況在離體動物血管的研究中也可以觀察到。這些體外實驗表明,血管收縮功能失調(diào)與非敗血癥和內(nèi)毒素血癥時伴隨的代謝性酸中毒無關(guān),也與由高循環(huán)濃度的兒茶酚胺誘導(dǎo)的受體下調(diào)及循環(huán)中的擴(kuò)血管代謝產(chǎn)物無關(guān)。
這些研究結(jié)果的共同特征是:無論內(nèi)皮細(xì)胞存在與否,對多種縮血管物質(zhì)如去甲腎上腺素、去氧腎上腺素、 indamidine(它促使鈣離子通過鈣通道內(nèi)流,也刺激內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放鈣離子)鈣激動劑[Bayk8644和(+)S-202-791]以及鈣離子載體A23-187和鈣離子本身導(dǎo)致的血管收縮均存在反應(yīng)性降低,只有對咖-啡-因及內(nèi)皮素的反應(yīng)不受或僅受輕微影響,這些研究表明,血管平滑肌的收縮能力并未被內(nèi)毒素脂多糖消除,故不存在血管收縮機制的缺陷。
阻斷花生四烯酸代謝途徑后,不管血管內(nèi)皮存在與否,離體動物的胸主動脈經(jīng)內(nèi)毒素處理4h后均表現(xiàn)出對縮血管物質(zhì)反應(yīng)性降低。這種低反應(yīng)性能夠被左旋精氨酸和一氧化氮途徑的抑制劑如L-NMMA和L-NAME所糾正,因此表明左旋精氨酸和一氧化氮途徑參與其中。D-NMMA則不能抑制該反應(yīng)性,且L-NMME糾正血管低反應(yīng)性的效應(yīng)能夠被左旋而非右旋精氨酸克服。不管是左旋還是右旋精氨酸本身對未經(jīng)內(nèi)毒素處理的離體大鼠的主動脈的縮血管反應(yīng)均無影響,但是對經(jīng)內(nèi)毒素處理的離體鼠的主動脈,左旋精氨酸有抑制作用。上述研究表明,L-NMMA系左旋精氨酸的具有立體結(jié)構(gòu)專一性的拮抗劑:內(nèi)源性的左旋精氨酸并不能使經(jīng)過內(nèi)毒素處理的大鼠血管完-全激活以產(chǎn)生足夠的一氧化氮,至于左旋精氨酸在對照組和經(jīng)內(nèi)毒素處理組效應(yīng)的差別是否與它組織穿透力的不同有關(guān),仍需進(jìn)一步研究。
左旋精氨酸-一氧化氮途徑被脂多糖激活的證據(jù)也可由平行測定血管中的環(huán)磷酸鳥苷水平,以及通過使用亞甲基藍(lán)、LY-83583等可溶性鳥苷酸環(huán)化酶的抑制劑以消除一氧化氮從而抑制可溶性鳥苷酸環(huán)化酶來獲得支持。實驗中,對經(jīng)內(nèi)毒素處理組和對照組均測定環(huán)磷酸鳥苷水平,然后兩組均暴露于去甲腎上腺素。結(jié)果顯示,不管血管內(nèi)皮存在與否,經(jīng)內(nèi)毒素處理組主動脈環(huán)鳥苷酸水平均顯著高于對照組,升高的環(huán)磷酸鳥苷水平可被L-NAME抵消,進(jìn)一步加入左旋精氨酸后又能使之恢復(fù)。在對照組,左旋精氨酸并不影響環(huán)磷酸鳥苷水平。使用鳥嘌呤環(huán)化酶抑制劑亞甲基藍(lán)或LY83583可使血管反應(yīng)性恢復(fù)。
左旋精氨酸-一氧化氮途徑被脂多糖激活的證據(jù)也可由平行測定血管中的環(huán)磷酸鳥苷水平,以及通過使用亞甲基藍(lán)、LY-83583等可溶性鳥苷酸環(huán)化酶的抑制劑以消除一氧化氮從而抑制可溶性鳥苷酸環(huán)化酶來獲得支持。實驗中,對經(jīng)內(nèi)毒素處理組和對照組均測定環(huán)磷酸鳥苷水平,然后兩組均暴露于去甲腎上腺素。結(jié)果顯示,不管血管內(nèi)皮存在與否,經(jīng)內(nèi)毒素處理組主動脈環(huán)鳥苷酸水平均顯著高于對照組,升高的環(huán)磷酸鳥苷水平可被L-NAME抵消,進(jìn)一步加入左旋精氨酸后又能使之恢復(fù)。在對照組,左旋精氨酸并不影響環(huán)磷酸鳥苷水平。使用鳥嘌呤環(huán)化酶抑制劑亞甲基藍(lán)或LY83583可使血管反應(yīng)性恢復(fù)。
主動脈對血管阻力無影響,有學(xué)者對小動脈,即股動脈及第三級腸系膜血管進(jìn)行了研究,結(jié)果認(rèn)為,只有加入了超氧化物歧化酶并阻止超氧化自由基對一氧化氮的破壞時,內(nèi)毒素的血管反應(yīng)性降低才表現(xiàn)出來。然而,去甲腎上腺素所致的小血管收縮可被左旋精氨酸松弛,尤其是當(dāng)血管內(nèi)皮存在時更為明顯。L-NAME或亞甲基藍(lán)能夠阻斷上述舒解效應(yīng)。
內(nèi)毒素脂多糖激活左旋精氨酸-一氧化氮途徑的體外實驗證據(jù)可歸納如下:
(1)動物離體主動脈血管平滑肌經(jīng)內(nèi)毒素預(yù)處理4h后表現(xiàn)出對去甲腎上腺素的低反應(yīng)性,這與環(huán)磷酸鳥苷水平升高有關(guān)。使用左旋精氨酸-一氧化氮途徑抑制劑L-NMMA、L-NAME或可溶性鳥嘌呤環(huán)化酶抑制劑亞甲基藍(lán)或-一氧化氮裂解劑LY83583時方可使血管反應(yīng)性恢復(fù)。
(2)內(nèi)毒素可激活左旋精氨酸-一氧化氮途徑的血管阻力,但是依賴于外源性的左旋精氨酸。值得一提的是,所需的左旋精氨酸的濃度與臨床上內(nèi)毒素血癥患者的相當(dāng)。脂多糖可激活內(nèi)皮細(xì)胞外左旋精氨酸-一氧化氮途徑,Moncada等研究發(fā)現(xiàn),在內(nèi)毒素處理的大鼠,其主動脈中層一氧化氮合成酶活力增加,故支持這一結(jié)論。