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1、在進行血中內(nèi)毒素測定時,要注意選擇方法和試劑。
2、血漿或血清制備
作為臨床上常用樣本主要為血漿,其使用率占95%以上,因此作為體液主要部分血漿的制備就顯得十分重要。據(jù)Das報道:內(nèi)毒素一般除了游離狀態(tài)外,還大量附著在血小板上,因此用含有大量血小板的血漿作為樣品更為合適。在制備人血漿或動物血漿時,目前國外為了防止細胞的破壞多采用低溫分離,使用含有大量血小板的血漿樣品,即在4℃1000gx10分鐘分離條件,或在無低溫離心機時用3000gx40秒分離條件。切不可在常溫下進行高速、長時間分離,另外,在分離血漿或血清時,要避免細菌的污染。
血清的制備:用不加抗凝劑的注射器采血轉(zhuǎn)入離心管中,在冰水浴中放置30分鐘,4℃條件下、1000xg、10分鐘進行離心分離血清。
血漿或血清分離后,若暫時不用,可在-80℃冰凍保存,并在1個月以內(nèi)使用。注意為了避免吸附內(nèi)毒素,請使用玻璃制試管保存。
3、抗凝劑種類及影響
在制備血漿時由于加入一定的抗凝劑,因此抗凝劑的種類和加入量對于回收率都有很大的影響,一般常用抗凝劑主要有:肝素,枸櫞酸鈉及EDTA等,其中以肝素的使用最多。然而,我們知道大量的肝素會對內(nèi)毒素反應有干擾作用,尤其對稀釋加熱法和氯仿提取法將使回收率下降,而對PCA法影響較少,因此在制備血漿時肝素的加放量只需2~5μl/ml即可。